TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)

TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光) 简介

TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒 （FITC） 提供了一种快速便捷的细胞凋亡检测方法。当细胞发生细胞凋亡时，特定的DNA核酸内切酶将被激活，切断核小体之间的基因组DNA。凋亡细胞的DNA被切割成180-200 bp片段的多聚体。断裂DNA的暴露3'-OH可以通过末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）与荧光素标记的dUTP催化，可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。FITC的最*激发波长和发射波长分别为488 nm和525 nm。

TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)使用方法

样品准备1.1 贴壁细胞：a. 洗涤：弃去培养基，加入 PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。b. 固定：加入固定液 4℃ 固定 30 分钟。c. 洗涤：加入 PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。轻轻弃去 PBS，并用滤纸吸去多余的液体。d. 通透：加入通透液室温孵育 5 分钟。e. 洗涤：加入 PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。轻轻弃去 PBS，并用滤纸吸去多余的液体。

一个。步骤1.d后，用PBS（1×）洗涤细胞两次：加入2mL PBS（1×）悬浮细胞并涡旋以充分混合。在3°C下以4×g离心细胞400-4分钟，小心吸出上体。

b.加入 100 μL 膜联蛋白 V 结合缓冲液（10 mM HEPES、140 mM 氯化钠、2.5 mM 氯化钙2，pH 7.4）悬浮JC-1染色的细胞。

c. 加入 5 μL 膜联蛋白 V，并在 37°C、5% CO 下孵育细胞2，持续 15 分钟。

注意：5 μL 适用于膜联蛋白 V，使用剂量可能因不同供应商而异。

d. 加入 400 μL 膜联蛋白 V 结合缓冲液（10 mM HEPES、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl2，pH 7.4）悬浮细胞。在流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪上分析样品。

标记与检测对于贴壁细胞或组织切片：

加入 50 μL TUNEL 工作液，37℃ 避光孵育 60 分钟。加入 PBS 洗涤 3 次。加入抗荧光淬灭封片液（HY-K1042）封片后在荧光显微镜下观察荧光效果。注：a. 注意避免 TUNEL 工作液的蒸发。

注：b. 对于 6 孔板的每个孔，宜加入 100 μL TUNEL 工作液。注：c. 若 TUNEL 反应过强，可用 TdT Dilution Buffer 将 TdT Enzyme 稀释 2-5 倍后再进行操作。

对于悬浮细胞：加入 50 μL TUNEL 工作液，37℃ 避光孵育 60 分钟。加入 PBS 洗涤 3 次。加入 250-500 μL PBS 充分悬浮细胞，用流式细胞仪检测或涂片后在荧光显微镜下观察荧光效果。

注：若 TUNEL 反应过强，可用 TdT Dilution Buffer 将 TdT Enzyme 稀释 2-5 倍后再进行操作。

注意事项及储存

1.样品通透前可用石蜡笔在样品周围描绘样品轮廓，以便于后续通透处理。

2. 所有处理好的样本建议置于湿盒中保持湿润，切勿让样品干燥。

3. 固定悬浮细胞时，为防止细胞聚集成团，建议置于摇床中进行固定。

4. 配制 TUNEL 工作液时需充分混匀，现用现配，注意避光，禁止冷冻保存。

5. 荧光染料都存在淬灭的问题，染色后应尽快检测荧光强度，且整个实验过程尽量避光下进行。

6. 若 TUNEL 反应过强，可用TdT Dilution Buffer 将 TdT Enzyme 稀释 2-5 倍后再进行操作。

7.-20°C，避光保存1 年。