线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1)

线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1)  简介

JC-1形成称为J-聚集体的复合物。在低能的细胞中，JC-1仍以单体形式存在。当在510nm处激发时，JC-1单体发出绿色荧光，在~527nm处最*。JC-1的聚集体发出橙红色荧光，最*在~590nm处。

线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1) 使用方法

1. 细胞标记

一个。在密度为 6× 12 的 24、96、5 或 10 孔板中培养细胞5细胞/毫升。按照正常方案孵育细胞。

b.确保JC-1和DMSO已平衡至室温，然后将一个小瓶的内容物溶解在提供的200μLDMSO中，制备230μM储备溶液。

c.对于对照管，让CCCP的小瓶达到室温，加入1μLCCCP（50mM）。将细胞在 37°C 下孵育 5 分钟。

d.每孔加入10μL JC-1（200μM），使最终浓度为2μM。在 37°C、5% CO 下孵育细胞2，持续 15-20 分钟。如果随后有其他标记，例如膜联蛋白V，则从步骤2.a开始。如果没有，请继续执行步骤 1.e。

e.孵育后，在3°C下以4×g离心细胞400-4分钟，小心吸出上体。

f.用 PBS （1×） 洗涤细胞两次：加入 2 mL PBS （1×） 悬浮细胞并涡旋以充分混合。在3°C下以4×g离心细胞400-4分钟，小心吸出上体。

g.加入 500 μL PBS （1×） 悬浮细胞。在流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪上分析样品。

2. 附加贴标膜联蛋白 V

一个。步骤1.d后，用PBS（1×）洗涤细胞两次：加入2mL PBS（1×）悬浮细胞并涡旋以充分混合。在3°C下以4×g离心细胞400-4分钟，小心吸出上体。

b.加入 100 μL 膜联蛋白 V 结合缓冲液（10 mM HEPES、140 mM 氯化钠、2.5 mM 氯化钙2，pH 7.4）悬浮JC-1染色的细胞。

c. 加入 5 μL 膜联蛋白 V，并在 37°C、5% CO 下孵育细胞2，持续 15 分钟。

注意：5 μL 适用于膜联蛋白 V，使用剂量可能因不同供应商而异。

d. 加入 400 μL 膜联蛋白 V 结合缓冲液（10 mM HEPES、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl2，pH 7.4）悬浮细胞。在流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪上分析样品。

注意事项及储存

1. 根据实际用量取用 JC-1 (200 μM)。未用完的储存液，避光保存，并避免反复冻融。 

2. CCCP 为线粒体电子传递链抑制剂，对人体有害，请注意小心防护

3.4°C，避光保存6个月;-20°C，可保存1 年。