JC-1 (CBIC2)

JC-1 (CBIC2)J简介

JC-1 (CBIC2) 是一种广泛用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针。JC-1 染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-1 聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光 (Ex=585 nm, Em=590 nm) ；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，产生绿色荧光 (Ex=514 nm, Em=529 nm) 。

JC-1 (CBIC2)使用方法

JC-1 染色液的配制
1.1 制备储存液
用 DMSO 配制 5 mg/mL 的 JC-1。如用 1 mL DMSO 溶解 5 mg JC-1。
注：1) JC-1 储存液建议分装后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存。
1.2 工作液的配制
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 1-20 μg/mL 的 JC-1 工作液。
注：1) 请根据实际情况调整 JC-1 工作液浓度，且现用现配。
2) 如果 JC-1 进入细胞的效果不好，可向工作也液中加入适量 20% Pluronic F127 溶液，终浓度为 0.02-0.05%，Pluronic F127 可以防止 JC-1 在缓冲液中聚合并帮助其进入细胞。
JC-1染色
1) 以6孔板为例进行细胞铺板，密度为 5×105 cells/mL。37℃，5% CO2 培养箱培养过夜。
注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过 1×106/mL，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。
2) 取 0.5 mL 细胞悬液至无菌的离心管内。
3) 400 g 离心 3-5 min；弃上清。
4) 用 1 mL JC-1 工作液重悬细胞，于 37℃，5% CO2 培养箱孵育 15-30 min。
5) 室温条件 400 g 离心 5 min；吸掉上清。
6) 用 2 mL 细胞培养液或者缓冲液重悬细胞，之后室温条件 400 g 离心 5 min；弃上清，重复两次。
7) 用 1 mL 新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，立刻进行后续的流式分析或荧光显微镜观察。
8) 数据分析 (流式细胞仪) ：含有红色 JC-1 聚集物的健康细胞线粒体用 FL2 通道检测；含有绿色 JC-1 单体的凋亡或不健康细胞用 FL1 (FITC) 通道检测。

注：若用于酶标仪检测，用 300 μL 缓冲液重悬细胞；然后按照每孔 100 μL 的量将染色好的细胞转移到不透光的 96 孔板内，即可进行荧光酶标板分析。

JC-1 (CBIC2)注意事项及储存

1.请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light)。-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。