细胞凋亡与坏死检测试剂盒

细胞凋亡与坏死检测试剂盒简介

细胞凋亡和坏死检测试剂盒提供了一种快速便捷的方法来检测细胞凋亡和坏死。该试剂盒包含两种与DNA结合的即用型染料。Hoechst 33342是一种蓝色荧光染料（与DNA结合时激发/发射最*值≈352/461 nm），对凋亡细胞中的浓缩染色质染色比正常细胞中的染色质染色更亮。碘化丙啶（PI）是一种细胞膜不透水的染料，在535nm处具有特征激发最*值，在617nm处具有最*发射，与核酸插入。同时使用这两种染料使得可以通过流式细胞仪或荧光显微镜区分正常细胞群、凋亡细胞群和死细胞群。正常细胞呈现弱蓝色荧光+弱红色荧光，凋亡细胞显示强蓝色荧光+弱红色荧光，坏死细胞显示强蓝色荧光+强红色荧光。

细胞凋亡与坏死检测试剂盒使用方法

1.收集细胞

悬浮细胞：在 1.5 mL 离心管中加入约 105-106 个细胞。4℃，1000 g 离心 3-5 min，弃去上清。加入 1 mL 预冷的 PBS 重悬细胞，4℃，1000 g 离心 3-5 min后弃去上清，保留细胞沉淀。贴壁细胞：弃去细胞培养液。加入胰蛋*酶消化细胞，制备单细胞悬液。4℃，1000 g 离心 3-5 min，弃去上清。加入 1 mL 预冷的 PBS 重悬细胞，4℃，1000 g 离心 3-5 min，弃去上清，保留细胞沉淀。

2. 双染色 

2.1 加入 0.8-1 mL Cell Stain Buffer 重悬细胞。 

2.2 加入 5 μL Hoechst 33342 Stain。 

2.3 加入 5 μL PI Stain。2.4 充分混匀后冰浴或 4℃ 孵育 20-30 min。 

3. 检测与分析 

3.1 流式细胞仪检测：用流式细胞仪检测荧光强度。 

3.2 荧光显微镜检测：4℃，1000 g 离心 3-5 min，弃去上清，加入 PBS 洗涤一次，涂片后用荧光显微镜检测荧光强度。 

注：Hoechst 33342 和双链 DNA 结合后，最*激发波长为 352 nm，最*发射波长为 461 nm；PI 和双链 DNA 结合后，最*激发波长为 535 nm，最*发射波长为 617 nm

注意事项及储存

1. 荧光染料都存在淬灭的问题，染色后应尽快检测荧光强度。

2. Hoechst 33342 和 PI 对光敏感，整个实验过程尽量避光下进行。 

3. Hoechst 33342 和碘化丙啶（PI）均对人体有害，操作时务必小心。 

4.4°C，避光保存6个月;-20°C，可保存1 年。