CTG 发光法细胞活力检测试剂盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)简介

ATP生物发光技术的原理如下：荧光素酶以荧光素、三磷酸腺苷（ATP）和O2为底物，在Mg2+存在下将化学能转化为光能。在荧光氟酶催化的发光反应中，ATP的浓度与一定浓度范围内的发光强度呈线性关系。ATP的量与存在的细胞数量成正比。基于此，CTG细胞活力检测试剂可用于细胞计数或ATP含量的活力测定。

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)使用方法

1.细胞准备接种细胞：

在 96 孔板中每孔接种 100 μL 细胞，确保每孔细胞数量在 5 × 10^4 以内。设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照，按照培养细胞的常规方法进行培养。

注：a) 接种细胞数目因检测所用孔板不同存在差异，如用 384 孔板，每孔接种 25 μL 细胞，确保每孔细胞数量在 1 × 104 以内。

b) 可根据实验目的设计实验方案，如：加入药物处理细胞，应注意设置对照。若待测药物的溶剂含量较高，荧光素酶反应可能会被干扰，致化学发光信号受到影响，可设置含有溶剂的细胞培养液的对照孔以排除此干扰。

c) 建议设置细胞浓度梯度，以确定 CTG 检测的条件。

2. 检测试剂的准备

按照 96 孔板每孔 100 μL 的 CTG Cell Viability Detection Reagent 的量 (384 孔板每孔 25 μL 的 CTG Cell Viability Detection Reagent 的量)，即 V细胞：VCTG Reagent= 1:1)，取适量本产品，解冻后平衡至室温。

3. 细胞活力检测

1) 取出细胞培养板，室温平衡 10 min。注：室温平衡通常不建议超过 30 min。

2) 向 96 孔板的每孔加入 100 μL CTG Cell Viability Detection Reagent (384 孔板每孔加入 25 μL CTG Cell Viability Detection Reagent)。

3) 室温振荡混匀 2 min，以促进细胞充分裂解。

4) 室温孵育 10 min，使发光信号趋于稳定。

5) 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光测定，每个孔的检测时间一般为 0.25-1 s。

注：具体参数可根据仪器类型及检测灵敏度进行适当调整。

6) 根据化学发光读数直接计算细胞的相对活力，或根据 ATP 标准曲线计算出 ATP 的量以计算出细胞的相对活力。

注：检测效果可能会因细胞种类及生长状态不同而有所差异，对于一些 ATP 含量特别高的细胞，当细胞数量至 5 × 10^4 后可能不会再呈现明显的线性关系，但化学发光读数还是会继续升高

注意事项及储存

1. 本产品中含有荧光素酶，其活性对温度较为敏感，反复冻融会致其逐渐失活，建议分装冻存，避免反复冻融。

2. 本产品避免室温保存，如需多次使用，建议将试剂分装后冻存，分装所用耗材应避免 ATP 污染。

3. 反复冻融时，可能会导致试剂中出现少量沉淀，可平衡至室温后观测沉淀溶解情况，如仍有残留，可离心后去除。

4. 若待测药物的溶剂含量较高，荧光素酶反应可能会被干扰，致化学发光信号受到影响，可设置含有溶剂的细胞培养液的对照孔以排除此干扰。

5. 检测时需使用适合于细胞培养的白色或黑色的多孔板 (96 孔板或 384 孔板)，普通透明多孔板的相邻孔之间可能会产生相互干扰

6.-20°C保存1年；长期保存，建议避光。