Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)简介

Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于 细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。 CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8 在 电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 的formazan。

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)使用方法

1) 接种细胞于培养瓶并使之生长4–24小时，然后开始检测。
2) 在细胞培养液中直接加入1/10体积的 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)，充分混合，保证孔中颜色均一性，但不可有气泡产生。对96孔板，每100µl培养液加入10µl活性检测试剂。
3) 继续培养1-4小时至颜色变为橙色，如细胞密度/活力过低，可适当延长培养时间至24小时，但需注意不可孵育过度。
4) 用酶标仪读取450nm光吸收值。典型的OD值在0.8-1.5之间，但0.5-2.5都是可接受的范围。
注意：在添加Cell Counting Kit-8 (CCK-8)的细胞培养基中，在450nm处会有轻微的自发吸收值。该荧光背景随培养基、pH值、培养时间、暴露于光线的时间等因素的变化而变化。典型的吸收值在孵育2小时后为0.1-0.2。为了纠正背景，准备一个或多个无细胞的对照孔，计算其平均的荧光值，然后从试验孔中扣除该值。
5) 可选步骤：在100μl细胞中加入10 μl 3 % SDS 以终止反应，可在3天内读取数据。
6) 细胞活力计算：
细胞活力*（％）=[A（药物+）— A（空白）] / [A（药物—）— A（空白）] ×1
A（药物+）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度；
A（药物—）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度；
A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度。

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项及储存

1. 使用前请充分混匀，避免反复冻融。
2. 如果长时间孵育（过夜），请确保在试剂添加与孵育期间维持无菌状态。细菌也能够是本试剂显色。
3. 使用本品必须包含阳性、阴性和无细胞（纯培养液）对照。

4.4°C保存一年；-20°C保存2年；长期保存，建议避光。