Anti-Flag 亲和凝胶

Anti-Flag 亲和凝胶简介

抗标志亲和凝胶是一种纯化的小鼠IgG2b单克隆抗体，共价连接到琼脂糖琼脂糖4B上。该产品具有高蛋白结合能力（>1.1 mg 蛋白/mL）和稳定性，是大肠杆菌、酵母、昆虫和哺乳动物表达系统中表达的Flag标记蛋白的高效纯化或免疫沉淀（IP）的理想选择。

Anti-Flag 亲和凝胶使用方法

1. 亲和凝胶的制备

1.1 彻*悬浮抗旗亲和凝胶。将 10 μL 凝胶悬液（约 5 μL 沉降凝胶）转移到干净的管中。

1.2 加入 600 μL 洗涤缓冲液以重悬凝胶。以 10，000 rpm 离心 30 秒。小心地取出上清液。确保去除大部分洗涤缓冲液，并且没有丢弃凝胶。重复3-4次。

2. 蛋白质结合

2.1 将 500 μL 细胞裂解物（含有 Flag 标记蛋白的样品）加入步骤 1.2 的清洁凝胶中。在 2°C 下孵育 4 小时，同时轻轻旋转试管。为了获得更高的结合效率，请孵育过夜。

2.2以10，000rpm离心30秒，并将上清液转移到新的立方体中（上清液可用于确定是否有残留的Flag标记蛋白）。

3. 洗涤

用 500 μL 洗涤缓冲液洗涤凝胶，以 10，000 rpm 离心 30 秒。小心地取出上清液。确保去除大部分洗涤缓冲液，并且没有丢弃凝胶。洗涤至OD 280上清液<0.05。

4. 洗脱/检测

根据蛋白质特性或进一步用途，推荐三种洗脱方法：

4.1 使用SDS-PAGE上样缓冲液洗脱凝胶电泳和免疫印迹。

向每个试管中加入 50 μL 1× SDS-PAGE 上样缓冲液。搅拌均匀，煮沸5分钟。以 10，000 rpm 离心 30 秒。保留上清液进行SDS-PAGE分析。

4.2 在酸性条件下用洗脱缓冲液A洗脱。

向每个试管中加入 50 μL 洗脱缓冲液 A。充分混合并在室温下孵育 10 分钟。以10，000rpm离心30秒，然后将上清液转移到新管中。每 25 μL 洗脱液加入 50 μL 中和缓冲液以中和低 pH 值，这可能有助于保持目标蛋白的生物活性。

4.3 在天然条件下用洗脱缓冲液B洗脱。

向每个试管中加入 30-50 μL 洗脱缓冲液 B。在室温下轻轻摇动或在旋转器上孵育 1 小时或在 2ºC 下孵育 4 小时。 以 10，000 rpm 离心 30 秒，然后将上清液转移到新管中。

注意：为了立即使用，将洗脱液储存在4ºC，或储存在-20ºC以长期储存。

注意事项及储存

1.本产品使用前务必充分重悬凝胶。

2. 使用本产品进行 IP 实验前，需先确认样品中 Flag 标签蛋白的表达情况。

3. 为最*限度的降低蛋白质降解，请配合使用 biodis 蛋白酶抑制剂 cocktails。

4.在-20ºC以长期储存。