Protein A

Protein A 简介

蛋白 A 磁珠通常用于从血清、细胞培养上清液或腹水中分离抗体，以及用于细胞或组织提取物中抗原的免疫沉淀和免疫共沉淀。蛋白A磁珠含有重组蛋白A，具有IgG结合结构域。

在免疫沉淀过程中，只需要少量磁珠，非特异性结合 低。

Protein A 使用方法

1.磁珠预处理

将磁珠充分混悬，取 25-50 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，充分混悬，置于磁力架，磁性分离，弃上清；重复以上洗涤步骤 2 次。

2. 抗体与磁珠结合 

(1) 抗体预处理：使用结合/洗涤缓冲液将抗体稀释至终浓度为 5-50 μg/mL。

(2) 抗体-磁珠结合：将稀释好的 400 μL 抗体加入步骤 2 处理好的磁珠中，充分混悬，置于翻转混合仪孵育 (常温，30 mins；4ºC，2 hours)，磁性分离，收集磁珠，上清液收集于新的 EP 管中，以备后续使用。 

(3) 洗涤：加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清；重复洗涤 4 次。 

注：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于在正常现象，不会影响实验结果。

3.抗原与抗体-磁珠复合物结合

(1) 抗原-抗体-磁珠复合物结合：加入 400 μL 步骤 1 准备的抗原样品，充分混悬，置于翻转混合仪孵育 (常温，30 mins；4ºC，2 hours)，磁性分离，弃上清。

(2) 洗涤：使用 400 μL 结合/洗涤缓冲液充分重悬磁珠，磁性分离，弃上清；重复洗涤 4 次。

5. 抗原洗脱 

提供以下两种抗原洗脱方案，操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。

a 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适合用于 SDS-PAGE 检测。步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 25-50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95ºC 加热 5 mins。分离磁珠，收集上清，进行 SDS-PAGE 检测。 

b 非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 25-50 μL 洗脱缓冲液，室温孵育 10 mins；分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，并立即滴入总体积 1/10体积的中和缓冲液 (0.1 M NaOH)，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品用于后期功能分析。

注意事项及储存

1.储存在 4°C，可稳定保存长达 2 年。

2.请勿离心、干燥或冷冻磁珠。