蛋白 A/G 磁珠

蛋白 A/G 磁珠简介

蛋白 A/G 磁珠通常用于从血清、细胞培养物中分离抗体 上清液或腹水，以及用于细胞或组织中抗原的免疫沉淀和免疫共沉淀 提取 物。蛋白 A/G 磁珠含有重组蛋白 A/G，该蛋白结合了 蛋白A和蛋白G。

在免疫沉淀过程中，只需要少量磁珠，非特异性结合 低。

蛋白 A/G 磁珠使用方法

1. 磁珠的制备

1.1 将磁珠重悬于小瓶中（倾斜并旋转 2 分钟或轻轻移液 10 次）。

1.2 将 25-50 μL 蛋白 A/G 磁珠转入 1.5 mL 管中（转印量可根据需要进行调整）。

1.3 向磁珠中加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，轻轻移液混合。将试管放入磁性支架中，将珠子收集到管的侧面（以下简称磁选）。取出并弃去上清液。重复此步骤 2 次。

2. 抗体结合

2.1 用结合/洗涤缓冲液将抗体 （Ab） 稀释至 5-50 μg/mL 的终浓度。Ab的最*量可以根据需要进行调整。

2.2 向蛋白 A/G 磁珠中加入 400 μL 稀释的 Ab。在室温下旋转试管 30 分钟或在 2°C 下旋转 4 小时。

2.3 进行磁选。如果需要，将上清液转移到新管中进行进一步分析。上清液是非结合级分。

2.4 向磁珠中加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，轻轻移液混合。将试管放入磁性支架中，将珠子收集到试管的侧面。取出并弃去上清液。重复此步骤 4 次。

3. 靶抗原的免疫沉淀

3.1 从磁选机中取出试管，加入含有抗原 （Ag） 的样品（通常在 5 μL 结合/洗涤缓冲液中为 50-400 μg）并轻轻移液以重悬蛋白 A/G 磁珠-Ab 复合物。

3.2 在室温下旋转孵育 30 分钟或在 2°C 下孵育 4 小时，以使 Ag 与蛋白 A/G 磁珠-Ab 复合物结合。

3.3 进行磁选。取出并弃去上清液。

3.4 每次洗涤使用 5 μL 结合/洗涤缓冲液洗涤 Magbeads-Ab-Ag 复合物 400 次。在每次洗涤之间进行磁分离，除去上清液并通过轻柔移液重悬。

3.5 将蛋白 A/G 磁珠-Ab-Ag 复合物重悬于 400 μL 结合/洗涤缓冲液中，并将磁珠悬浮液转移到干净的管中。建议这样做以避免与管壁结合的蛋白质共洗脱。

4. 洗脱

这是一种非变性洗脱方法。

4.1 进行磁分离并除去上清液。将 400 μL 结合/洗涤缓冲液加入试管中并旋转 5 分钟。进行磁分离1分钟并除去上清液。然后将 25-50 μL 洗脱缓冲液加入装有磁珠-Ab-Ag 复合物的管中，旋转 5 分钟。

4.2 进行磁选，收集上清液。

4.3 最终溶液可用作变性SDS-PAGE的样品。或者，洗脱液可以立即用中和缓冲液调节至中性pH值，并用于进一步分析。

注意事项及储存

1.储存在 4°C，可稳定保存长达 2 年。

2.请勿离心、干燥或冷冻磁珠。