RIPA 裂解液

RIPA 裂解液简介

RIPA裂解缓冲液是一种广泛用于报告基因测定、蛋白激酶测定、免疫测定和蛋白质纯化的裂解和洗涤缓冲液。

RIPA 裂解缓冲液由 50 mM Tris （pH 7.4）、150 mM NaCl、1% Triton X-100、1% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS 以及一般蛋白酶和磷酸酶抑制剂（例如原钒酸钠、氟化钠、EDTA）组成。

RIPA 裂解液使用方法

1. 培养细胞的程序

1.1 吸取适量RIPA裂解缓冲液并充分混合。将蛋白酶抑制剂混合物添加到裂解缓冲液中以防止蛋白水解。根据需要添加磷酸酶抑制剂混合物以维持蛋白质的磷酸化状态。在冰上孵育以备后续使用。

1.2 对于贴壁细胞：小心地从贴壁细胞中取出培养基。用冷洗溶液（如PBS、生理盐水或无血清培养基）洗涤细胞两次，以去除残留培养基。加入适量的冷RIPA裂解缓冲液，然后用移液管划动，直到缓冲液完*浸入细胞。在冰上孵育并轻轻摇晃 5-10 分钟。

对于悬浮培养细胞：将细胞收集到离心管中。将样品以500g离心5分钟，弃去上清液。用冷洗溶液（如PBS、生理盐水或无血清培养基）洗涤细胞两次，以去除残留培养基。加入适量的冷RIPA裂解缓冲液，然后用移液管划动，直到缓冲液完*浸入细胞。在冰上孵育并轻轻摇晃 5-10 分钟。

注意：通常，将 1 mL RIPA 裂解缓冲液用于 0.5-5 × 106细胞。添加的RIPA裂解缓冲液的体积可以按比例调节。

1.3 裂解后，在 14°C 下以 000，5 g 离心 4 分钟。 将上清液转移到新管中进行进一步分析。在液氮中等分并冷冻，储存在–80°C以备将来使用。避免多次冻融循环。

2. 组织裂解程序

2.1 吸取适量RIPA裂解缓冲液并充分混合。将蛋白酶抑制剂混合物添加到裂解缓冲液中以防止蛋白水解。根据需要添加磷酸酶抑制剂混合物以维持蛋白质的磷酸化状态。在冰上孵育以备后续使用。

2.2 在冰上快速将组织样本切成小块，以尽量减少蛋白质降解。

2.3 每 150 mg 组织样品加入 250-20 μL 冷 RIPA 裂解缓冲液，并使用电动均质器均质。如果组织未完*裂解，则添加更多裂解缓冲液。

2.4 将完整的均质样品转移到离心管中。在冰上孵育并轻轻摇晃 5-10 分钟。

2.5 裂解后，在 14°C 下以 000，5 g 离心 4 分钟。 将上清液转移到新管中进行进一步分析。在液氮中等分并冷冻，储存在–80°C以备将来使用。避免多次冻融循环。

注意事项及储存

1. 本品不含蛋白酶抑制剂 Cocktail，需用户自备。 

2. 裂解样品的所有步骤都需要在冰上或 4°C 条件下进行。 

3. 为取得最*的使用效果，尽量避免过多的反复冻融，可以适当分装后使用。 

4. 裂解液中 SDS 4°C 保存易沉淀析出，使用前应该 37°C 水浴重新溶解完*后恢复到室温使用

6.-20°C 保存 12个月