PEI 转染试剂

PEI 转染试剂产品简介

PEI是基因转染中常用的聚合物载体。它由阳离子聚合物组成，可以将核酸引入真核细胞。在基于聚合物的转染中，外源性DNA与阳离子聚合物形成复合物，阳离子聚合物通过内吞作用进入宿主细胞。

PEI转染试剂基于25 kDa PEI设计。通过引入功能基因对其进行修饰，增强DNA的结合能力，降低细胞毒性。此外，PEI修饰的细胞摄取和内体逃逸功能显著增强。PEI转染试剂效率高、毒性低、稳定性强，适用于多种细胞类型，如HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和HeLa等，甚至一些难以转染的细胞。

PEI 转染试剂使用方法

1. 准备待转染细胞 

1.1 贴壁细胞：转染前一天，将胰*消化后的细胞进行铺板 (0.3-2 × 105 个细胞/孔)，至细胞密度达到 60-70% 进行细胞转染。 

1.2 悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-DNA 复合物之前，先进行细胞铺板，每 500 μL 生长培养基中加入 2-5 × 105 个细胞。注：为提高转染效率，建议使用生长状态良好且生长处于指数期、存活率 >90% 的细胞进行转染。 

2. 准备转染试剂-核酸复合物

2.1 取 1 μg 质粒 DNA 至 1.5 mL EP 管中，加入 1.25 μL PEI Transfection Reagent，吹吸混匀，室温孵育 3 min。 

注：a) 通常情况下，DNA (μg) 和 PEI Transfection Reagent (μL) 的用量比例为 1:1.25。为提高转染效果，可在 1:1~1:2 范围内调整以优化转染效果。b) 转染条件因细胞类型和培养条件不同而有所区别，可做预实验摸索转染比例。2.2 加入 100 μL 无血清基础培养基 (与培养体系一致，无血清及双抗)，轻柔混匀，室温孵育 30 min，即形成转染试剂-核酸复合物。注：该转染试剂-核酸复合物在室温下 4 h 内仍保持稳定。2.3 加入 150 μL 无血清基础培养基 (与培养体系一致，无血清及双抗) 稀释复合物

3. 细胞转染 

吸除原培养基，将转染试剂-核酸复合物 (250 μL) 加入每孔细胞，轻柔混匀，在培养箱中孵育 4-16 h 后，及时补充新鲜生长培养基 (500 μL/孔)。 

4. 分析转染细胞 

转染细胞培养 36-48 h 后，可使用荧光检测法、Western Blot、ELISA、RT-PCR、流式细胞术、报告基因等检测转染效果，或加入筛选药物进行稳定细胞株的筛选

注意事项及储存

1.转染时，应选用高纯度、无菌、无污染的 DNA/RNA。

2. 细胞状态会极大影响转染效率，待转染细胞应处于良好生长状态。

3. 血清会对转染效果产生一定程度的干扰，为提高转染效率，转染过程中，建议使用无血清培养基。

4.转染过程中，抗生素的存在可能导致转染效率降低及细胞毒性，不建议在转染培养基中添加抗生素。

5.在-20°C下储存1年。避免重复的冻融。